FDA与ISO食品微生物检验方法(2)

ISO4833-2003 菌落总数测定流程

检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）

适当十倍稀释样品

选择2~3个连续适宜稀释度

各取1mL分别加入灭菌平皿内

每皿内加入适量（12~15mL）

平板计数琼脂（PCA），

30±1 ℃ ，72 ±3 h

ISO4833-2003菌落计数方法

2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如

下： N=∑C/（n1+0.1*n2）*d

z所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：NE=m 固体样

品： NE=m×d-1

z无菌生长：液体样品：less than 1; 固体样品：less than 1 ×d-1

z最终结果保留前两位有效数字。 z选择连续

菌落总数测定几点说明

30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养

要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。

z鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上

出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活

菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。 z由于检样中采用

菌落总数测定几点要求

15min，主要为防止细菌增殖和

产生片状菌落。样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。皿内琼脂凝固后，不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。

z检样过程中应用稀释剂做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。

同时，检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以

了解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。

z检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与平板计数琼

脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃放置，以便在计数检样时用作对照。 z每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过

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