德州地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及灭活疫苗免疫保护效力研究(10)

德州地区副猪嗜ｍ杆菌的分离裕定及火活疫茁保护效力研究

膜炎、心包炎和脑膜炎猪的浆液性分泌物中的一种革兰氏阴性杆菌，而这种微生物可能是由Ｓｃｈｅｒｍｅｒ和Ｅｈｒｌｉｃｈ在１９２２年首次分离，在随后大量的临床病例分离的基础上，人们对ＨＰｓ的研究逐步深入。ＨＰｓ为革兰氏阴性、具多种不同形态的细菌，从单个球杆状到长的、细长的以至丝状菌体，常可见荚膜。该菌生长依赖炯酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤ或Ｖ因子），不需要Ｘ因子（血红素和其它卟啉类物质）。其在巧克力培养基上培养２４～４８ｈ生长较差，为光滑型、灰白色透明、直径大约０．５ｍｍ菌落。如与金黄色葡萄球菌共同培养时，ｔｉＰｓ在葡萄球菌条状菌苔附近呈卫星生长，生长良好，菌落直径可达１～２ｍｍ。ＨＰｓ在血液琼脂上呈小而透明的不溶血菌落，在加ＮＡＤ、马血清和酵母浸｛Ｉ｛物的ＰＰＬＯ培养基上生长良好。生化反应：尿酶试验阴性、氧化酶阴性、接触酶试验阳性，可发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、Ｄ一核糖和麦芽糖等。

随着世界养猪业的发展，该病已成为全球范围内影响养猪业的典犁细菌性疾病。西方发达国家在大量分离副猪嗜ｍ杆菌的基础上，发现该菌的血清型复杂多样，按Ｋｉｅｌｅｔｉｎ—Ｒａｐｐ—Ｇａｂｒｉｄｅｓｏｎ（ＫＲＧ）琼脂扩散血清分型方法，至少可将副猪嗜ｍ杆菌分为１５个血清型，另有２０％以上的分离株血清型不可定；根据德国、美国、加拿大、日本和两班牙等国家的血清流行病学调查，以血清型４、５和１３最为流行。

１．１ＨＰｓ分离鉴定与培养

副猪嗜血杆菌的生长依赖ＮＡＤ，对细菌的分离培养可按常规操作将病料接种于鲜血琼脂平板（在金黄色葡萄球菌划线附近生长），补充ＮＡＤ的ＰＰＬＯ液体培养基或巧克力琼脂平板。细菌的分离培养对确诊是必要的，但往往不能成功，这是冈为副猪嗜血杆菌十分娇嫩，相对于标本中可能同时出现的其它细菌，难以满足其生长需要。加拿大安大略省的诊断实验室用回归分析法（Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ）分析表明副猪嗜血杆菌的真实发病率可能为报道的ｌＯ倍之多，部分原因是由于难以确认采集来的标本中是否存在副猪嗜血杆菌。副猪嗜血杆菌不易培养的特性经常影响这种细菌从临床样品的分离。对副猪嗜ＪｆＩＬ杆菌分离鉴定的研究表明使用平板稀释技术和在培养基中加入抗生素（例如林肯霉素和杆菌肤）可以提高从被污染病料中的细菌分离率。细菌分离鉴定时应当采集处于疾病６

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