德州地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及灭活疫苗免疫保护效力研究(12)

东农业大学硕Ｉ：专业学位论文

急性期的猪并且没有应用抗菌素的病料，最好选择浆膜表面物质或渗出的脑脊髓液及心脏血液，这样既可以减少杂菌的污染又可以增加分离到致病菌的机率。在送到诊断实验室之前接种到转移培养基上，也能由这种液体中获得副猪嗜血杆菌。有时其它的ＮＡＤ依赖的细菌（Ｌ类嗜血杆菌、猪放线菌、吲哚放线菌等）会被误认为副猪嗜血杆菌，这些细菌在鼻窦、扁桃体或肺脏中大量存在，但只有较低的毒力，因此在进行生化鉴定时需要特别注意与以上其它不溶血的Ｖ一因子依赖性细菌区分开来。

１．２ｔｉＰｓ菌体结构

副猪嗜血杆菌的芮体具有多种不同的形态，从单个的球杆菌到长的、细长的、丝状的菌体。副猪嗜血杆菌通常具有荚膜，但在体外培养时易受影响。Ｍｏｒｏｚｕｍｉ和Ｎｉｃｏｌｅｔ对分离自外观健康猪的鼻腔和分离自病理状态下的猪的不同副猪嗜血杆菌菌株进行比较，包括是否具有荚膜，在吖啶黄中或在煮沸后的细菌粘附能力，以及在聚丙烯酞胺凝胶电泳（ＡＰＧＥ）后的多肤图谱。通过十六烷溴化三甲铵（Ｃｅｔａｖｌｏｎ，塞太弗伦）处理，发光情况检测和荚膜染色等方式对荚膜进行检查，结果３２株分离自不同组织的副猪嗜血杆菌中有２０株具有荚膜。研究发现有荚膜的菌株更加趋向于球杆菌形态，相比之下那些不能检测出荚膜的菌株具有多种形态，具有从短杆菌到纤细的丝状菌的变化，其中后一种菌株吖啶黄染色或煮沸后粘附在一起。根据该抽提物电泳时向正极移动，并且经高压蒸汽灭菌，蛋白酶或胰酶处理后仍然稳定等特点，研究人员推测这些荚膜物质为酸性多糖。十六烷澳化三甲铵沉淀实验表明培养时间延长（４８ｈ）以后荚膜物质丢失。另外，所研究的这些菌株中有四分之一菌株的荚膜物质不能通过十六烷溴化三甲铵沉淀，由此表明它们的化学结构不同，还存在其它的多糖结构。可以和溴化三甲铵发生反应的有荚膜菌株的可溶性抗原有热稳定性并且可以抵抗蛋白水解酶，因此表明酸性多精的存在。吖啶黄染色阳性的菌株属于一种特定的ＡＰＧＥ图谱（ＩＩ型），这些菌株似乎比那些主要从表面健康猪群的鼻腔分离的有荚膜菌株更加与病理状态相关联。由此提出假设，在吖啶黄中的凝集能力连同ＡＰＧＥ图谱型ｒｌ型可能与毒力的特殊结构有关。除了与荚膜因素有关以外，副猪嗜血杆菌在鸡胚绒毛膜和尿囊膜培养时同样具有细丝状纤毛样的结构。

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