体外微核试验方法研究进展(2)

体外微核试验方法研究进展

试验。A1O能与DNA结合发绿色荧光,与RNA结突变型,而TK6细胞为P53野生型。最近的研究发合发红色荧光,还能与酸性多糖结合发鲜红色荧光。现,与TK6细胞相比,WTK1细胞对诱变因子(电离A1O染色的微核比Giemsa染色更易辨认,细胞内由

辐射等)的抵抗力较强,生存率高,而对其诱发的基因

于化学物处理而产生的微核样包涵体容易与微核区突变敏感(9-10)。有研究表明,WTK1和L5178Y细别开来,使结果更加可靠。A1O染色法用于微核试胞对诱变物的反应各有特点,如同时应用于一个短测验的主要缺点是:染色不持久,必须在染色后短时间系统,有利于提高筛检化学物诱变性和致癌性的准确内进行阅片和计数。

Fenech和Surralles还先后报道了应用人外周血CYB的基础上,配合加阿糖胞苷(ARA-C)和/或加

性。

与其它体外试验一样,体外微核试验最大的缺陷活化才能表达其潜在的遗传毒性。应用具有代谢活

淋巴细胞微核试验来检测DNA的损伤。这是在加是缺乏体内代谢活化系统,而许多遗传毒物需经代谢羟基脲(HU)的方法,加ARA-C和/或HU的目的性的靶细胞进行体外短期试验成为近年来的研究热是抑制DNA多聚酶的活性,使DNA的损伤不能被点。SHE叙利亚仓鼠胚胎细胞保留有很高水平的代细胞内切除修复机制所修复,DNA断裂成两条,经过谢B(a)P的加单氧酶活性,所以B(a)P经SHE细胞一次细胞分裂后转化成微核。这样微核可以成为反代谢后,产生的活性物质可以直接作用于该细胞染色映在G0/G1期诱发的可切除修复的DNA损伤的生体产生微核。由小鼠胚胎制备的BALB/c3T3细胞、酰胺物学指标。但ARA-C和HU本身具有细胞毒性,能够代谢活化多环芳烃、

它们可能延长细胞周期,从而使微核率高峰的出现时间延长(6-7)。

112　培养哺乳类细胞系微核试验

物(1112)c3,该,是一种较好的体外

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用培养细胞进行微核试验,13。细胞色素P450(CYP)是代

用于靶细胞,谢活化许多诱变剂/致癌物的主要酶系,然而建株细胞因表达较低或完全不表达CYP而丧失了代谢活化假阴性的缺点;、分化、代能力。近年来应用遗传工程技术,使检测细胞具有这谢模式及DNA,故结果类表达的基因,并在实验中取得了一定结果。我国学比微生物试验系统有更大意义。L5178Y小鼠淋巴者应用RT-PCR技术和DNA重组技术,分别从人瘤细胞是目前国际通用的TK位点基因突变试验的肝细胞和人羊膜FL细胞中克隆出CYP2B6基因和标准靶细胞系,TK6人类成淋巴细胞系也是近年发CYP1A1基因的cDNA片段,构建真核细胞表达重组展起来的用于检测TK位点基因突变的细胞,这二种体,导入FL、V79和CHL细胞中获得稳定表达,并用细胞均呈悬浮生长,营养要求不高,生长迅速。张立双核微核法,以转基因的CHL-2B6、CHL-1A1表实等将这两种细胞用于微核试验,其实验方法简便,达株为靶细胞,分析鉴定其对一组前诱变剂的代谢活稳定性好(8)。研究发现,一些典型诱变剂在较低浓化能力,结果显示,转基因细胞在遗传毒理试验代谢

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度下即可诱导TK6细胞微核率增高,而在高浓度下活化研究方面具有重要的应用价值14-15。

则表现出明显的细胞毒性;另一方面,L5178Y细胞一些较严格的比较研究表明,常用于人外周血淋

对诱变剂的细胞毒性有较高的耐受性,较高浓度的诱巴细胞的胞质分裂阻断法的敏感性取决于受检因子,变剂在L5178Y细胞可诱导出比TK6细胞更高的微如检测电离辐射诱发的微核形成,胞质分裂阻断法明核率。两者的上述差异可能因为它们源于不同种属,显优于常规法;但对多数受检化学物,却未观察到这即人类细胞的细胞调控机制和DNA修复机制不同一优点。观察还发现,在双核细胞的胞质中,细胞通于啮齿类动物。WTK1细胞是新近发展的用于检测过各种途径形成的微核间或微核与主核间相互融合TK位点基因突变的细胞系,它与TK6细胞来自同

的机会增加,从而加大了微核的体积,减少了微核的

一母细胞,唯一不同之处是WTK1细胞为P53基因数目(16)。还发现加入CYB后,无论体内或体外微核—110

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