体外微核试验方法研究进展(3)

体外微核试验方法研究进展

被排出细胞的机会增多,故使胞质分裂阻断法的敏感细胞,经过培养分析微核来判断肿瘤对射线的敏感性下降(17)。而且Lindholm发现CYB可能诱发微核性。不过,微核率与对射线的敏感性之间有无良好的

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形成(18)。为此,日本学者应用哺乳类细胞系发展了相关性,还未取得一致意见23。

其它细胞微核试验一种不需CYB的更为简便的体外微核试验技术,并116　认为该法可以代替体外染色体分析(19)。113　肝原代细胞微核试验

人和动物的胃粘膜、人的口颊上皮、人发毛囊、植物类的蚕豆根尖、紫露草等多种细胞的微核试验都有

肝脏是体内代谢功能最活跃的器官,利用肝原代报道。细胞作为靶细胞进行体外微核试验,一个非常突出的

体外微核试验的新应用优点是这种细胞仍保留了肝微粒体代谢酶系和其它2　酶系,靶细胞本身即具有转化前诱变剂和前致癌物为

体内非整倍体的形成与自发性流产、先天畸形、

活性分子的能力,因此在测试系统中不必另加代谢活智力发育迟缓和致癌过程有关,而许多从结构上分析化系统。但由于肝细胞分裂很缓慢,一般状态下不适为高度可疑的非整倍体诱发剂在环境及临床中正广于做微核试验,故长期以来一直未用作微核试验的靶泛使用,国际上对非整倍体形成机制及诱发因素研究细胞。直到近几年发展起来可使大鼠肝细胞分裂的已经获得很多有价值的成果。微核试验是目前非整细胞培养技术,才使肝原代细胞微核试验得以发展。倍体诱发剂的主要检测方法之一,微核可由无着丝粒已有应用该方法研究X线、二乙基亚硝胺、MMS、环,在鉴别微核来源的磷酰胺诱发肝原代细胞微核的报道(20)。但是,目前前提下,。目尚无有效方法在体外培养条件下维持肝细胞代谢酶:

　Sumner染色后检查微的活性,每次实验都需重新制备,使用不方便;另外,可能由于在分离肝细胞时会造成DNA,,据此判断微性对照组微核率较高,核是来自整条染色体或无着丝粒断片。由整条染色。114　人精子2Kamiguchi于年首次报道了用人精子与去

体形成的微核被认为是由非整倍体诱发剂引起的,而无着丝粒断片则是由断裂剂引发的。

212　微核DNA含量　Feulgen染色后分析测定微

透明带地鼠卵受精,培养至2细胞胚的微核试验(21),

核中DNA含量,通常非整倍体诱发剂诱导的微核

应用该技术研究γ射线体外照射健康人精子后的遗DNA含量高于断裂剂诱导的微核DNA含量。微核面积　Wright染色,一般断裂剂形成的微传效应,结果表明物理性诱变因子诱发的染色体断裂213　

损伤在人精子2细胞胚微核试验中得到了充分表达。核面积大约是非遗传毒物诱发微核面积的一半,据此陈壁锋等也应用该技术研究了不依赖S期的化学断就可判断是由非整倍体诱发剂还是由断裂剂诱发的裂剂平阳霉素对人精子的遗传效应,证实该方法的敏微核。

免疫荧光法　应用抗着丝粒抗体免疫染色法检感性和稳定性较好。这一新的检测系统能直接反映214　

诱变剂对人类生殖细胞的诱变效应,为研究化学物质测微核中的着丝粒。具体方法是CREST抗体同着对人精子染色体损伤作用提供了一种新的简便快速丝粒蛋白抗原相结合,再以作为第二抗体的荧光抗抗的手段,它在遗传毒理学、医学遗传学和优生学等多体同CREST抗体结合,根据检测结果确定微核来个学科领域中以及环境化学物质的遗传毒性监测和源,判断微核诱导剂是非整倍体诱发剂还是断裂职业人群的遗传危害监护方面具有广阔的应用前剂(24)。景(22)。

115　人原代肿瘤细胞微核试验

215　荧光原位杂交(FISH)法　同时用端粒DNA探

针和γ卫星DNA探针在细胞中进行FISH,分析微核

培养人原代肿瘤细胞微核试验是为评价放疗效的有着丝粒信息,仅含端粒DNA探针信号的微核由果而发展起来的。用射线照射直接取自患者的肿瘤无着丝粒染色体断片形成;含有2个端粒DNA探针

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