近代有机分析实验讲义(21)

实验八：高效液相色谱外标法精确测定有机农药残留的浓度

实验目的：

1、应用高效液相色谱外标法测定磺胺类抗生素的浓度

2、学习谱图和外标法测定数据的处理方法

实验原理：标准曲线法也称外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法。用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线，在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上直接查出注入色谱柱中样品组分的浓度。

试剂： 乙腈、甲醇: 色谱纯， 0.05%甲酸溶液，超纯水。磺胺嘧啶，磺胺吡啶 主要仪器： 岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18 色谱柱

色谱条件： 流动相: 乙腈和 0.05%甲酸混合溶液； 测定波长 280 nm; 流速 1.0 mL/min；柱温 30℃；进样量 20 μL。

实验步骤：

1、准备

1.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流动相是乙腈(B)和0.05%甲酸溶液(A)，分别用有机相系和水相系的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20min。）

1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

1.3配制样品浓度为1000ppm（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤

膜过滤。（分别精确称磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准品各0.100g，再分别用甲醇溶解，用一次性无菌注射器和0.45 mm有机相过滤膜过滤后，于100 mL容量瓶定容，配成1 mg/mL单一药物标准储备溶液。用1 mL移液管分别移取1 mg/mL标准储备溶液2、4、6和8 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容稀释10倍，配成0.2、0.4、0.6和0.8 mg/mL储备溶液，置于- 4℃冰箱中储存。

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